2012年1月,由LGR公司發明的專利Method For Analysis Of Isotopes In Bodily Fluids(專利號:9110008)在美國獲得批準。專利發明人Douglas Steven Baer及其伙伴創造性的應用LGR水同位素分析儀912-0032,成功的測量了生物體細胞液中的氫氧同位素δ18O,?δ17O和δ2H。該方法區別于傳統的同位素比質譜儀法,不會在對樣品的前處理過程中產生分餾,同時,測量結果也不會受到細胞液中其他物質的干擾。
其基本前處理方法如下:
將30~250?μL(典型為200?μL)的樣品加入到離心管中,加入5 mg ZnSO4,以8000rpm的轉速離心10 min,取10~75?μL上清液,然后直接用LGR水同位素分析儀(912-0032)進行測定。加入ZnSO4是為了沉淀蛋白質,原理是金屬離子對蛋白質有親和作用,可以引發形成蛋白質交聯,形成沉淀,也可用到其他金屬離子如(Ca / Al / Cu),陰離子一般用氯化物或者是硫酸根。同時,該專利中還提到,以前的一些分離蛋白質的方法不適合用此設備,具體方法如下:
1、用鹽析來沉淀蛋白質,鹽析去除效率只有90%,并不完全,并且高濃度的鹽本身對測試結果會有影響;
2、有一種稱之為Cohn process的方法,通過加入乙醇或者其他有機溶劑(甲醇、丙酮、乙二醇、三氯乙酸、肼)來沉淀蛋白質,乙醇的加入導致PH降低,蛋白質被沉淀下來,但是乙醇或其他類似有機溶劑中的H會與H2O中的H發生置換反應,影響測定結果,這可能就是之前提到的為啥醇類物質對測定結果會有影響的原因;
3、通過有機聚合物來沉淀蛋白質,該有機物通常是聚乙二醇,同上,同樣不適用;
4、通過加酸到樣品中,與蛋白中的氨基形成不溶性的鹽,但是酸化后形成的NH4+中的H同樣會與H2O發生置換反應;
5、絮凝。通過加入藻酸鹽、角叉菜膠、單寧酸來去除蛋白質,該方法產生的效應與Cohn process一樣。
詳細情況請參考: